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呕吐毒素亲和柱的检测过程解析
发布时间:2019-10-27   点击次数:45次
呕吐毒素亲和柱检测原理:测定的基础是抗原抗体反应。DON单克隆抗体连接在柱内凝胶上,样品中的DON经过提取、过滤、稀释,然后将样品提取液缓慢的通过DON呕吐毒素亲和柱。在呕吐毒素亲和柱内,毒素与抗体结合,之后洗涤呕吐毒素亲和柱除去没有被结合的杂质,用甲醇洗脱DON。
 
呕吐毒素亲和柱的检测过程解析:
一:样品前处理
称取10g 面粉加入100ml 水,高速均质1 分钟,用玻璃纤维滤纸过滤至澄清,取2ml 滤液作为待上样液。
 
二:检测前的准备和注意事项
1. 将所需的免疫亲和柱在使用前回温至室温(20-25℃)。
2. 免疫亲和柱的上下端有塑料塞子,在使用时可以取下。
3. 在使用的过程中避免免疫亲和柱的干燥。例外情况为洗脱前短暂的排空和洗脱后的完全排空
4. 过高的压力或真空提取设备产生的负压会压紧凝胶而导致回收率降低。
 
三:呕吐毒素亲和柱操作过程
• 将5ml 或10ml 注射器连接于免疫亲和柱上端(通过小柱连接件)。
• 2ml 处理好的样品液以1-2 滴/ 秒的速度通过亲合柱,弃掉流出的液体。
• 以5ml 水淋洗柱子一次,弃掉流出的液体。
• 利用真空设备压入空气(约10 秒),确保排除所有的液体。
• 用1ml 甲醇缓慢洗脱(流速约为2-3 秒每滴),残留的洗脱液使用空气压出或真空抽出(30 秒)并将洗脱液收集于干净的收集管中。
• 将洗脱液吹干后加入1ml 流动相复溶,用于液相色谱检测。

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